Mae egwyddor weithredol pibed Pasteur yn seiliedig yn bennaf ar lif a yrrir gan ddisgyrchiant a gweithred capilari, ynghyd â rheoli gwahaniaethau pwysedd aer â llaw i hwyluso dyhead a throsglwyddo hylifau.
Rheoli sugnedd â llaw: Mae'r gweithredwr yn defnyddio sugnedd ar ben llydan y pibed-naill ai ar lafar neu gan ddefnyddio bwlb rwber ategol-i greu gwasgedd negyddol o fewn y tiwb, gan dynnu hylif i mewn i'r blaen mân.
Disgyrchiant-Gweinyddu Dosbarthu: Unwaith y rhyddheir sugnedd, mae'r hylif yn llifo allan yn naturiol o dan ddylanwad disgyrchiant; gellir cynorthwyo'r gwaith dosbarthu hefyd trwy wasgu'r corff pibed yn ysgafn neu ogwyddo'r llestr derbyn.
Atgynhyrchadwyedd defnyn: Trwy raddnodi'r gymhareb "diferion fesul mililitr," mae'r pibed yn galluogi trosglwyddiad meintiol bras, gan ei gwneud yn addas ar gyfer gweithdrefnau sy'n gofyn am ailadroddadwyedd yn hytrach na manwl gywirdeb absoliwt.
Sicrwydd Anffrwythlondeb: Cyn ei ddefnyddio, gellir gosod plwg cotwm yn y pen llydan a'i sterileiddio i atal halogiad microbaidd wrth drin-arfer sy'n arbennig o gyffredin mewn arbrofion microbiolegol.